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DESENVOLVIMENTO
DE MARCADORES MICROSSATÉLITES PARA O FUNGO CAUSADOR DA FERRUGEM
ASIATICA (PHAKOPSORA PACHYRHIZI)
MULATO, B.M.¹*; GIMENES,
M.A.¹* RESUMO O fungo Phakopsora pachyrhizi é o patógeno responsável pela ferrugem asiática da soja. Plantas severamente infectadas apresentam desfolha precoce comprometendo a formação e o enchimento das vagens e o peso final dos grãos, reduzindo a produtividade. Há relatos de redução de produção, devido esta doença, de 10 a 40% na Tailândia, 10% a 90% na Índia, 10 a 50% no sul da China e até 40% no Japão. O prejuízo causado pela doença no Brasil na safra de 2002/2003 ficou por volta de um bilhão de dólares. Cultivares tolerantes à doença têm sido registrados no Brasil e, a análise da variabilidade de populações do patógeno faz-se essencial para a escolha de estratégias eficazes para o controle do fungo. Este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento de marcadores moleculares do tipo microssatélite, para serem utilizados na análise de variabilidade genética de populações de P. pachyrhizi oriundas de regiões geográficas brasileiras distintas. Para tanto, foi obtida uma biblioteca de DNA genômico enriquecida para microssatélites do tipo GT e GA. O DNA do fungo foi extraído com sucesso a partir de esporos, germinados overnight à temperatura ambiente em água destilada. Este DNA foi digerido com a enzima RsaI, depois ligado a adaptadores e amplificado por PCR. Em seguida, selecionou-se os fragmentos que continham microssatélites através de oligonucleotideos [(GT)15 e (GA)15] biotinilados, capturados por partículas magnéticas ligadas a estreptavidina, a qual tem alta afinidade pela biotina. O DNA enriquecido para microssatélites foi amplificado por PCR e os fragmentos clonados no vetor pGEM-T-easy. Realizou-se a transformação de células quimio-competentes de E. coli com o produto de clonagem. As bactérias transformadas foram crescidas em oito placas com meio de cultura contendo ampicilina, IPTG e X-Gal, sendo 116 colônias positivas selecionadas, repicadas em meio líquido e armazenadas a -80°C para uso posterior. Os produtos de PCR obtidos diretamente de 116 colônias foram avaliados em gel de agarose, e em 105 delas foi observada a presença de um único inserto, sendo as 11 restantes descartadas para as reações de seqüenciamento. Portanto, os resultados obtidos indicam que o processo de obtenção da biblioteca foi eficaz e que as colônias positivas possuem seqüências de microssatélites. O seqüenciamento dos fragmentos de DNA de P. pachyrhizi está em andamento para validação dos resultados e para a escolha dos primers microssatélites a serem utilizados para estudo de variabilidade nesta espécie. Palavras-chave: soja, marcadores microssatélites, Phakopsora phachyrhizi, variabilidade genética. Título do projeto
do orientador: Desenvolvimento de marcadores microssatélites
e caracterização de loci para análise da variabilidade
genética de isolados do fungo Phakopsora pachyrhizi, causador
da ferrugem asiática na soja. Classificação
do trabalho na Tabela de Áreas do Conhecimento no CNPq: |