CARACTERIZAÇÃO DE SELEÇÕES DE MACADÂMIAS ATRAVÉS DE RAF

Bolsista: Diego Grando Módolo

Orientador: Haiko Enok Sawazaki

Instituição: Instituto Agronômico

Centro: Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Recursos Genéticos Vegetais

RESUMO

Este trabalho teve como objetivo encontrar marcadores específicos e estudar a variabilidade genética entre oito seleções de macadâmias com folhas de diferentes formatos, como bordas lisas ou espinhosas, coloração verde ou arroxeada e com ou sem resistência a ventania, utilizando a metodologia RAF, com a separação de bandas através de gel de agarose Metaphor e detecção com brometo de etídio ao invés de gel de poliacrilamida e detecção com radioisótopos ou fluorescência, com a finalidade de reduzir o custo da pesquisa. Foram coletadas folhas das variedades de macadâmia (Campinas B, Kau Haes 344, 920, Keauhou Haes 246, Mauka Haes 741, Keaau Haes 660, Flor Rosa e Africa 695). Estas folhas foram limpas com álcool e algodão e em seguida pesadas e congeladas a -20° C. Foram feitos dois tipos de extração, com CETAB ou Sarkosyl. A extração com Sarkosyl forneceu melhor resultado. As amostras de DNA foram quantificadas em gel de agarose e em seguida diluídas para se obter as concentrações ideais para a reação de RAF. Foram feitos cinqüenta e cinco testes de reações de RAF utilizando diferentes concentrações de DNA (50 ng, 100 ng, 150 ng e 200 ng) e enzima (1u; 1,5u; 2,0u; 2,5u; 3,0u; 3,5u; 4,0u; 4,5u e 5 u). As reações foram feitas em um volume de 10 ml, com 25mM KCl, 10mM Tris pH 8,4, 125mM deoxinucleotídeos; 5 mM MgCl2; 50 picomols de primer e 4 unidades de Taq DNA polimerase e processadas no termociclador da MJ com uma etapa inicial de 4 minutos a 94^oC e 30 ciclos de 94^oC por 30 segundos e 1 minuto a cada 57^oC, 56^oC, 55^oC, 54^oC e 53^oC e uma etapa final a 72^oC por 5 minutos. Os fragmentos foram separados em gel de 4% de agarose Metaphor com 11 cm de comprimento e as bandas visualizadas e fotografadas pelo Image Master. Os melhores primers foram o OPA04, OPA06, OPA18, OPB08; OPB11, OPB16, OPB13, OPC04, OPD19. Verificou-se que a quantidade de DNA é importante para a reação de RAF, pois pequenas diferenças afetam a reação. Através deste método foram visualizadas cerca de 50 bandas de 10 a 300 pares de bases.

Palavras-chave: fingerprint; variabilidade genética; marcador molecular; Macadamia integrifolia.

Título do projeto do orientador: Caracterização de seleções de Macadâmias através de RAF

Programa/projeto: CNPq - IAC/PIBIC

Apoio Financeiro: CNPq, outros.

Classificação do trabalho na Tabela de Áreas do Conhecimento no CNPq:

Grande-área: Ciências Agrárias

Área: Agronomia

Sub-área: Melhoramento Vegetal

Especialidade: Biologia Molecular